细胞培养最重要的就是保持无菌环境，实验室无菌、培养液无菌、耗材无菌，为了给细胞创造良好的无菌环境，让细胞生长的更加安心无忧，小编整理了细胞培养过程中消毒灭菌的方法，供大家参考。

1房间消毒

1.1紫外线消毒

紫外线消毒是一种物理消毒方法，辐照能量低，能杀灭直接照射到的微生物，包括细菌繁殖体、芽孢、分支杆菌、病毒、真菌、立克次体和支原体等，凡是被上述微生物污染的表面、水和空气均可采用紫外线消毒。

紫外线消毒的原理主要是用紫外光摧毁微生物的遗传物质核酸（DNA或RNA）使其不能分裂复制。除此之外，紫外线还可引起微生物其他结构的破坏。微生物不能复制繁殖，就会自然死亡，从而达到消毒的效果。

紫外线消毒的适宜温度范围是20~40℃，温度过高或过低均会影响消毒效果，同时紫外线的消毒效果与紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关。辐射强度会随距离增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。因此紫外灯与被照射物的距离和照射时间要适合。离地面2米的30W紫外灯可照射9平方米房间，每天照射2~3小时，期间可间隔30分钟。灯管离地面2米以外要延长照射时间，2.5米照射效果较差。紫外灯照射工作台的距离不应超过1.5米，照射时间30分钟为宜。

紫外线对微生物有强大的杀伤力，对人体同样有一定的伤害作用，人体最易受伤的部位是眼睛，因此在任何时候都不可以直视亮着的紫外灯管。紫外灯也会对皮肤造成伤害，并且对培养细胞与试剂等也会产生不良影响，因此不要在紫外线灯照射下进行操作。

1.2臭氧熏蒸

臭氧灭菌为溶菌级方法，杀菌彻底，无残留，杀菌广谱，可杀灭细菌繁殖体和芽孢、病毒、真菌等，并可破坏肉毒杆菌毒素。另外，臭氧对霉菌都有杀灭作用。

臭氧由于稳定性差，很快会自行分解为氧气或单个氧原子，而单个氧原子能自行结合成氧分子，不存在任何有毒残留物，所以，臭氧是一种无污染的消毒剂。

臭氧为气体，能迅速弥漫到整个灭菌空间，灭菌无死角。而传统的灭菌消毒方法，无论是紫外线，还是化学熏蒸法，都有不彻底、有死角、工作量大、有残留污染或有异味等缺点，并有可能损害人体健康。如用紫外线消毒，在光线照射不到的地方没有效果，有衰退、穿透力弱、使用寿命不长等缺点。化学熏蒸法也存在不足之处，如对抗药性很强的细菌和病毒，则杀菌效果不明显。

1.3酒精、新洁尔灭消毒

实验室常用75%酒精对操作者皮肤、操作台表面以及实验室墙壁进行消毒，75%酒精的消毒原理是能够导致细胞脱水，同时致使蛋白质变性。

0.1%新洁尔灭对于微生物细胞膜有破坏作用，通过影响其通透性而起到消毒作用。新洁尔灭对革兰氏阳性菌的作用强，对革兰氏阴性菌也有作用，但对抗酸杆菌如结核菌杆、芽饱菌、霉菌等作用很微弱。

2设备消毒

细胞培养箱作为实验室常用设备，在使用过程中需要定期进行消毒，常用的消毒方法有：

（1）先用纯水擦拭，再用95%酒精擦拭内壁，紫外线照射即可；

（2）直接用75%酒精擦拭内壁，通风10分钟，紫外线照射30分钟；

（3）如果没有紫外线照射，一般用70%的酒精擦洗，然后再用0.1%的新洁尔灭擦洗，可再用高锰酸钾和甲醛1:1比例熏一遍，注意要是熏的话千万注意混合之后马上离开，因为味道具有刺激性；

（4）先用75%的酒精擦拭内壁，然后用甲醛、高锰酸钾熏蒸一个晚上，然后通风一整天（同时打开紫外线照射）；

（5）把培养箱里的板层拿出来高压一下，箱壁用75％酒精擦一遍，再用紫外线照一夜。

3物品、试剂消毒灭菌

3.1 干热灭菌

干热灭菌法是在干燥环境下用高温杀死细菌和细菌芽孢的技术。主要用于灭菌玻璃制品、金属制品、抗热的塑料制品以及不能接触蒸汽的物品。灭菌时温度需保持在160℃，并且持续90~120分钟，

干热灭菌完成后不可立即打开，须等物品逐渐冷却后再打开，防止物品因为温度骤变，出现破裂。

3.2 湿热灭菌

湿热灭菌是利用热蒸汽灭菌，热蒸汽穿透力强，使细胞蛋白质变性，能有效地杀灭微生物。可应用于热稳定的液体（水、盐溶液、特殊配方的培养基）、玻璃器皿、金属器皿等，通常需要在121℃条件下放置30min。湿热灭菌完成后的物品是潮湿的，需要及时将物品放在烘箱或干燥架中，干燥完成后，再储存备用，否则，潮湿的物品表面容易滋生微生物，造成污染。

3.3 过滤除菌

不耐热的液体可以采用微孔过滤器除菌，利用微孔滤膜将大于孔径的细菌等微生物截留，从而达到除菌目的。

常用方法一般有正压过滤法和负压过滤法，正压过滤法是使用可用针式滤器、连线式多碟滤器以及筒状滤器等进行过滤除菌；负压过滤法是将真空瓶与滤器相连，再利用真空管或真空泵进行过滤除菌。目前，大多实验室常采用微孔滤膜进行过滤除菌。